羧基磁珠蛋白A磁珠IP/Co-IP/pull-down/CHIP基本原理及
Source:羧基磁珠Author:admin Addtime:2019/04/25 Click:
裂解细胞
1、收集细胞1000rmp，5min，RT
2、PBS 洗，离心1000rmp，5min
3、加400ul IP lysis buffer（0.1％Triton）1：25加cocktail 冰上孵育 30min
4、针头过5次，冰上，旋转孵育，15min
5、12000rpm，20min，4度，留上清，去沉淀 留取1/10体积细胞裂解液做input
欧联抗体
1、取Protein A beads 于EP管中（50ul），PBS洗3次，
度1000转离心2min 1:1留液体
2、按抗体说明书将抗体加入beads中，补IP Lysis buffer至600ul
度旋转孵育1.5h
3、4度，1000转离心2min 1:1留液体
CO-IP
1、将细胞裂解液加入耦联好抗体的beads中，4度静音混合器上结合4h
2、加入IP Lysis buffer+0.1% Triton，4度旋转孵育3-5min，洗3次
转，2min 充分吸净
3、IP Lysis buffer 4度旋转孵育3-5min，洗3次
转，2min 充分吸净
4、补加50ul IP Lysis buffer，加入sample buffer，煮蛋白，上样。
磁珠免疫共沉淀实验流程：www.ex-dna.com 羧基磁珠 蛋白A磁珠
