蛋白酶k简介-蛋白酶k厂家供应

蛋白酶K是一种从白色念 珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，具有很高 的比活性，是DNA提取的关键试剂。

据资料显示：该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGTA（ph8.0）至终浓度为2mmol/l,以鳌合Ca2+。

 

该酶 在较广的pH范围（4〜12.5)内及高温 (50〜70°C)均有活性，用于质粒或基因组 DNA、RNA的分离。

 

在DNA提取中，主 要作用是酶解与核酸结合的组蛋白，使 DNA游离在溶液中，随后用不同方法进行 抽提，除去杂质，收集DNA。

 

EDTA等螯 合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。蛋 白酶K贮存液一般为10mg/ml或20mg/ml。 贮存于一20°C。蛋白酶K溶液为无色透明， 如出现沉淀就不能再使用.

 

从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。
 

蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—100μg/ml。在较广的pH范围内（pH 4-12.5）均有活性。

 

推荐反应缓冲液：50mMTris-HCl(pH7.5),10mM CaCl2 。

 

蛋白酶K配制标准：20mg/ml蛋白酶K配制标准（proteinase K）：将200mg的蛋白酶K加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20℃。