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河南省洛阳市洛阳国家大学科技园
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二．NHS 磁珠
链霉亲和素磁珠
1.保存溶液是什么？
答：1×PBS，含0.1%（v/v）Tween -20，0.1%（w/v）NaN3。
2.保质期多久？
答：保质期为1年。
3.抗体结合量多少？
答：抗体结合量>20μg/mg beads。
4.链霉亲和素磁珠的结合能力？
答：游离生物素结合量为1000 pmol/mg beads
生物素化单链寡核苷酸结合量为400 pmol/mg beads
生物素化IgG结合量为20μg/mg beads。
5.封闭条件？
答：含1%-5% BSA的 PBST缓冲液，室温反应30min-1h。
6.能不能用于细胞分选？
答：有文献报道，可以用于细胞阴选 。细胞阳选请慎重考虑，暂无支撑数据。
7.如何将生物素标记的生物配体与SA磁珠分离？
答：方法一：0.1% SDA，煮沸5min;
方法二： pH=8.2，含95%甲酰胺的10mM EDTA中，65℃ 5min或者90℃ 2min。 脱落率95%。
NHS 磁珠
1.Mag NHS的抗体偶联量多大？
答：偶联量>30μg IgG/mg磁珠
偶联量为35-71μg protein A/mg磁珠。
2.抗体中含0.02% NaN3是否需要去除？如何去除？
答：NaN3虽然会对抗体跟磁珠的结合形成竞争。一般情况下，小于0.05%NaN3的可以忽略不计。如果NaN3含量多，可以采用透析的方法去除。
3.该磁珠用于化学发光检测，空白背景值很高，具体原因？
答：不同体系磁珠的使用效果不同，对于背景值高的体系，需要采用不同的封闭体系。
4.确定合适的Coupling Buffer的实验方法和判断方法有哪些？
答：为方便实验操作，可以采用原蛋白保存溶液，必须不含有氨基小分子。一般采用PBS或者MES。
5.对于免疫沉淀实验，背景高怎么解决？
答：采用1～5%BSA封闭。
6.Mag NHS开封使用后，一周后使用，发现偶联效果明显降低，是否是因为NHS基团降解？
答：该磁珠只要密封保存4℃冰箱即可，不会存在明显的基团水解情况。偶联效果降低主要跟实验操作过程相关。建议重复实验。
7.确定合适的偶联蛋白浓度的实验方法和判断方法有哪些？
答：Mag NHS磁珠的IgG偶联量为30μg/mg磁珠。取1mg磁珠作为反应量时，加入IgG的量为45μg-60μg左右。并且配制IgG溶液的体积越少越好，但要保证磁珠能够分散。
8.Mag NHS和Magrose NHS磁珠怎么选择？
答：Mag NHS磁珠灵敏度高，用于检测、免疫沉淀实验。
Magrose NHS磁珠载量高，用于纯化方向。
免疫沉淀磁珠
1.免疫沉淀磁珠在洗脱了抗原之后，如何回收处理磁珠？
答：免疫沉淀磁珠为一次性使用，不建议回收磁珠，否则可能影响下一次测试。
2.IP 试剂盒是否适合做抗体纯化？
答：不建议将 IP 试剂盒用于抗体纯化。
3.纯化得到的抗体体积较少，用透析除盐的方法可能损失较大，还有没有其他方法除盐？
答：纯化得到的抗体，还可以用超滤的方法除盐。
4.一次反应可以结合多少抗体？
答：一次反应为100μL磁珠悬液，结合抗体的量为30μg。