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长知识!动物DNA的简易提取法

Source:多功能磁力架Author:admin Addtime:2018/08/31 Click:



★所需的材料:①鸡血细胞液5~10毫升(后面有鸡血细胞液的制作方法);②铁架台;③铁环;④镊子;⑤三角架;⑥酒精灯;⑦石棉网;⑧载玻片(可在化学品试剂店买);⑨玻璃棒;⑩滤纸;〇11滴管(化学品试剂店买);〇12量筒(100ml一个);〇13烧杯(100ml一个,50ml和500ml各2个);〇14试管(20ml2个);〇15漏斗(建议买3个);〇16试管夹(建议买4个);〇17纱布(建议买4个);〇18体积分数为95%的酒精溶液(就是浓度为95%的酒精,实验前置于冰箱内冷却24小时,建议冷藏室的温度调节在4℃~6℃之间最好);〇19蒸馏水(不少于500毫升);〇20质量浓度为0.1%克/ml(毫升)的柠檬酸钠溶液;〇21物质的量浓度为2mol(摩尔)/L(升)和0.015mol/L的氯化钠溶液;〇22二苯胺试剂(本试剂是成瓶的)。

★制取方法:①制备鸡血细胞→取刚杀过的鸡血(要干净,不能有杂质)50毫升左右,加入柠檬酸钠防止凝血;除去上面的清液,因为DNA主要存在于细胞核中。②提取核物质→加蒸馏水(一般是鸡血细胞的2倍半)并用玻璃棒搅拌不少于5分钟,使血细胞破裂,释放出的DNA往往和蛋白质结合在一起。③溶解核内DNA→DNA在高浓度的氯化钠溶液中溶解度很高,用2mol/L的氯化钠溶液可以加速核蛋白解聚,游离出DNA。④析出含DNA的黏稠物→加蒸馏水降低氯化钠溶液的浓度至0.14mol/L,此时DNA的溶解度下降,蛋白质的溶解度增高,从而使DNA和蛋白质分离,析出DNA(注意:此步骤要精确浓度)。⑤滤出含DNA的黏稠物→用纱布过滤得到丝状DNA的黏稠物。⑥DNA黏稠物再溶解→加入2mol/L的氯化钠溶液后,充分搅拌,使DNA溶解。⑦过滤含DNA的氯化钠溶液→用新纱布过滤。⑧提取较纯净的DNA→加入冷却的浓度为95%的酒精,使DNA沉淀、浓缩、形成含杂质较少的白色丝状物。⑨DNA的鉴定→DNA的鉴定可用二苯胺法,DNA遇到二苯胺变为蓝色;还可以用“甲基绿”法,“甲基绿”使DNA变为蓝绿色。

★注意事项:①盛放鸡血细胞的容器,最好是塑料容器。鸡血细胞破碎后,DNA容易被玻璃容器吸附。因此,实验中最好使用塑料的烧杯和试管,可以减少提取过程中DNA的损失。②实验中搅拌含有悬浮物的溶液时,玻璃棒不要直插烧杯底部,同时搅拌要轻慢。③用“甲基绿”法鉴别DNA时,可将“甲基绿”直接滴到玻璃棒的丝状物上后,要用水充分冲洗掉浮色后再观察。

动物基因组DNA提取试剂盒,磁珠法:www.ex-dna.com