Source:生物磁力架Author:admin Addtime:2019/03/13 Click:
使用说明书
【产品名称】羧基磁珠
【产品型号】Carboxyl
【产品介绍】
羧基磁珠以交联琼脂糖为基质，拥有良好的刚性、磁响应
性和单分散性，表面修饰有丰富的羧基(-COOH)，能够与含伯胺基的生物配体，如：蛋白质、抗体、寡聚核苷酸和药物分子等通过共价偶联的方法实现结合，是一种分子生物学和医学研究的重要载体工具。
【产品规格】
平均粒径
固形物浓度 10mg/ml
分散液 H2O
表面配基含量 60~100µmol/mL
【产品特点】
良好的磁响应性；
生物样品中良好的分散性；
良好的物理化学稳定性；
丰富的配体特异性结合位点；
高结合载量；
低非特异性吸附。
【作用对象】适用于含伯氨基的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体。
【有 效 期】两年(2~8 ℃保存)。
【偶联准备】
1.离心管，磁力架；
2.反应缓冲液：0.1M MES, 0.15M NaCl, pH6.0；
3.封闭缓冲液：0.2% BSA, 0.1M MES, 0.15M NaCl, pH 6.0；
4.清洗缓冲液：50mM Tris-HCl, 0.15M NaCl , pH7.2；
5.需要偶联的目标蛋白、抗体等生物配体；
6.偶联活化剂(EDC.HCl 溶液)：用反应缓冲液配置为 20mg/mL 浓度，现配现用。
【操作流程】
1.将磁珠混合均匀，取 1mL 磁珠(10%,v/v)加入到 2mL 离心管中，磁性分离去除上清液。
（注：“磁性分离”指将离心管置于外加磁场中，至磁珠吸附完全，约需要 30s。）
2.加入 1mL 去离子水，混合均匀，磁性分离去除上清液(重复 2 次)；
3.加入 500~1000µL 反应缓冲液，混合重悬磁珠，磁性分离去除上清液(重复 2 次)；
4.加入 200~400µL 反应缓冲液，混合重悬磁珠；
5.加入 200µL 现配偶联试剂(EDC.HCl 溶液)，室温旋转混合 30min；
6.加入 200~400µg 抗体或者蛋白质溶液(提前用 500µL 反应缓冲液溶解)，室温旋转混合 12~16hr，磁性分离去除上清液；
7.加入 1mL 封闭缓冲液，混合重悬磁珠，室温旋转混合 2hr，磁性分离去除上清液；
8.加入 1mL 清洗缓冲液，混合重悬磁珠，磁性分离去除上清液(重复 3~5 次)；
9.将上述磁珠分散于 0.5mL PBS, pH 7.4 短期保存，或分散于 PBS, pH 7.4,
0.1%BSA,0.02%NaN3 长期保存。
【注意事项】
1.偶联过程中不应含有除目标配体外含伯胺基团的物质，如：甘氨酸、BSA、Tris-
HCl 等，请注意您的抗体溶液是否含有上述物质；
2.磁珠使用和保存过程中应避免反复冻融；
3.羧基琼脂糖磁珠不可干燥；
4.不同抗体和蛋白与羧基琼脂糖磁珠的结合能力不同，客户可自行优化加入不同的抗体或者蛋白质量；
5.偶联过程无需移除 EDC 溶液，可适当提高 EDC 溶液浓度来提高偶联效率。
【其它】
