磁珠法提取试剂常见成分及原理13683842418

上回介绍了常见的手工法核酸提取试剂成分及原理。今天就给大家介绍一下时下最流行的磁珠法提取试剂的成分及原理吧。

 

 

磁珠法提取试剂常见成分

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SDS（十二烷基硫酸钠)——性质:

 

1、阴离子表面活性剂：对人体微毒；

 

2、优异的发泡剂：广泛用于洗衣粉、牙膏、洗发水、灭火器；

 

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   3、易溶于热水：当水温高于8℃（≈）时，SDS的溶解度随水温升高而急剧升高。当水温升至70℃（≈），溶解度升高不明显。

 

   SDS（十二烷基硫酸钠)——作用:

 

   它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的二、三级结构，使蛋白质变性。在高温下可以破坏蛋白质与核酸的结合，促进核酸释放。

 

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    乙基苯基聚乙二醇（Nonidet P 40 ）：

 

   NP-40是一种很温和的非离子型去垢剂，1%浓度基本可以破坏掉细胞膜，而对核膜的破坏作用较弱。

 

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     弱阳离子螯合树脂（Chelex-100）：

 

    提取液里面bling，bling的小珠子

 

    是一种由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成的化学螯合树脂，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，可螯合多价离子，特别是对高价金属离子有很高的亲和力和螯合作用。在低离子强度、碱性及煮沸的条件下，可以使细胞膜破裂，并使蛋白质变性，通过离心除去Chelex颗粒，使其结合的物质与DNA 分离。

 

   知识点：chelex-100在模板中残留过多会影响PCR扩增哦

 

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      蛋白酶K（Protein K）：是一种从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，是DNA提取的关键试剂。DNA提取中，主要作用是酶解与核酸结合的组蛋白，使DNA游离在溶液中 。

 

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      聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100——曲拉通）：

 

     曲拉通X-100是一种非离子表面活性剂，在水中不解离,在溶液中稳定性高，不易受强电解质无机盐类的影响，能与生物膜中的磷脂等脂质结合形成可溶性复合物；疏水端也能与膜蛋白的疏水区结合形成复合物，溶解于溶液中。

 

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      异硫氰酸胍（GITC）：

 

      强用力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。

 

      GITC也是经典RNA提取试剂TRIZOL的主要成分。

 

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      乙二胺四乙酸（EDTA）：

 

   是一种优良的钙、镁离子螯合剂。抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的

 

金属离子作辅基）。

 

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     Tris-Hcl：三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与盐酸混匀后形成的缓冲剂，为裂解液及核酸提供一个比较适宜的环境。

 

小结

     经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐 (如 Tris、EDTA、NaCl 等)。盐的作用，除了提供一个合适的裂解环境 (如 Tris)，还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏 (如 EDTA)、维持核酸结构的稳定 (如 NaCl) 等。