干货 | DNA提取检测及送样指南

听说，你还在为动植物重测序如何送样而发愁？别担忧，今天，小编就为大家送上科研取经必用武林秘籍——《动植物重测序送样检测指南》，帮助大家早日取得真经修成正果~拿去不谢！^-^

1. 肌肉组织

活体采集后处死，迅速取腿部肌肉组织10g左右，装入1.5mL灭菌离心管，置于液氮中速冻，置于-20℃或-80℃冰箱中保存；野外采集时则置于盛有约100mL 95%乙醇溶液或含50mmol/L EDTA的70%乙醇溶液的小口塑料瓶中固定保存，24小时内换固定剂一次。

对于野外采集的昆虫，建议饥饿24h使其消化道内的物质充分消化，以防外源DNA干扰实验结果。随后取腹或取胸部足股节等部位的肌肉。样品置福尔马林液中浸泡或75%酒精浸泡，常温密封保存2～4周，备用。

2. 血液

用一次性注射器采集静脉血1~2mL，注入装有ACD抗凝剂的灭菌离心管中，轻轻振荡使其与抗凝剂充分混匀，备用。血液分装后放入-70℃保存，保存期限不超过2个月或者-85℃保存，保存期限不超过3个月。

3. 植物

优先选用新鲜采集的样品送样，其次才是冻存的样品。采集样品时应选取核酸含量较多的部位，如植物的幼嫩部位。植物样品采集时建议用无菌水或 75% 乙醇擦拭或冲洗干净，再用吸水纸吸干样品表面液体；样品采集时建议将样品按照一次提取的量进行分管保存，避免提取时由于二次分管和并管引起样品降解。锡箔纸包装的组织样品，折叠时需有纹理可循，避免打开锡箔纸时样品洒落。所有植物组织样品均建议离体后立即液氮冻存，然后-80°C保存。

表1  不同物种的DNA提取方法

1. 不同的设备测定

我们会对提取后的DNA样品利用琼脂糖凝胶电泳及 Nanodrop进行初步检测，判定其纯度和完整性，接下来我们会用Qubit Fluorometer测定样品浓度，由于Nanodrop测定的是DNA和RNA的吸光值总合，且不管其是否降解都能测到，当杂质较少时，计算的浓度可做参考；Qubit是使用不同荧光染料只测DNA或RNA或蛋白质，因此测出的浓度最为准确，当样品杂质较多时，这两款仪器测定的数值差别也会较大。

2. 不同的电泳条件

来看下诺禾实验室对相同样品不同电泳条件的比较图吧~

图1  不同电泳条件的胶图效果

这四张电泳图说明，电压较大、电泳时间较短时，DNA集中在主带附近，而将电压调小或延长电泳时间后，降解的DNA会逐渐从电泳图中体现出来。所以只有在电泳条件为：100V、40min、1%琼脂糖、上样量1~2uL时，才能真正体现DNA的质量。

3. 不同的曝光时长

曝光时间的长短直接会影响胶图的真相。从下面的动图中，我们可以看出，随着曝光时间的延长，目标条带变亮，并且泳道里的拖尾也变得很明显，DNA的弥散显而易见。

图2  随着曝光时间延长而变化的胶图

1. 请将制备好的DNA样品保存在TE buffer 或超纯水中，并置于1.5mL 或2.0mL 的灭菌不黏管内，并用封口膜封好。管上用记号笔或标签清晰、准确地标记样品名称；考虑到Linux系统环境，建议您采用字母、数字或下划线 (即_) 来对样品进行命名。

2. 为确保实验的顺利，建议样品备份1~2份，避免部分样品降解导致重新取材、制备或送样，耽误时间。

表2  样品送样要求

3. 所有样品必须附带一份《样品信息单》，详细填写信息单上所要求的各项样品信息，包括样品编号、样品状态（DNA液体、干粉或组织叶片、血液、肌肉等）、是否可以用完，如果是DNA液体，还需标注浓度、体积、制备时间、电泳图等，随同样品一起寄出，并将电子版发送至销售人员邮箱。

4. 尽量使用干冰运输，干冰数量不低于15公斤，夏季运输需要适当增加用量；

5. 样品返还：如果样品特别珍贵，请提前说明。一般情况下，样本是不返还的哦。

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