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关于动物DNA的提取

Source:羧基磁珠Author:admin Addtime:2019/01/16 Click:

1, 称取动物组织10g材料于研钵,冰浴剪碎。

2, 加入(20ml)0.14mol/L NaCL-EDTA溶液 ,研磨成浆状。

【DNP与RNP在不同电解质溶液中的溶解度有较大差异。0.14mol/LNaCL溶液,DNP几乎不溶。

防止DNA或RNA酶解。提取时加入乙二胺四乙酸(EDTA)。】

3,离心弃去上清液,收集沉淀(含DNP)。

4,(加入0.14mol/L NaCL溶液,和EDTA溶液,沉淀的两倍体积)重复离心、洗涤(纯化?)

5,(加入0.14mol/L NaCL溶液,和EDTA溶液)加入25%的SDS5ml,边加边搅拌。

【使核酸与蛋白质分离】

6,加入冷氯仿-异丙醇混合液,离心,上层水相(含DNA钠盐),中层变性蛋白质沉淀,下层氯仿混合液,用吸管小心吸取上层水相,弃去沉淀,重复步骤。

7, 取上清液5mL于烧杯中,加入95%的乙醇,玻璃棒顺时针转动,出现粘稠丝状物(DNA)

【乙醇沉淀DNA】

8, 取上清液2mL,加入0.5mol/L过氯酸溶液5mL,室温放置5min,加入二苯胺试剂2mL,混匀,60℃保温1h,生成蓝色化合物。

【二苯胺法鉴定DNA】

 

要点:

(防止核酸降解)

1,低温;

2,抑制核酸酶的活性:加入 柠檬酸纳,EDTA,SDS等;

3,避免剧烈震荡。

(核蛋白脱去protein的方法)

氯仿-异丙醇法、苯酚法、去垢剂法等使蛋白质变性核蛋白解聚,释放核酸。

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