细胞分选是把一种特定细胞从多种细胞的混合样品中分离出来的过程。
其中,免疫磁珠分选是细胞分选的重要方法之一,可以在几分钟内从复杂的细胞混合物中分离出很高纯度的细胞。其原理是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。
细胞分选是把一种特定细胞从多种细胞的混合样品中分离出来的过程。
其中,免疫磁珠分选是细胞分选的重要方法之一,可以在几分钟内从复杂的细胞混合物中分离出很高纯度的细胞。
其原理是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合,在外加磁场中,通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中,无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性,不在磁场中停留,从而使细胞得以分离。
免疫磁珠法分为正选法和负选法
(1)正选法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞
(2)负选法-磁珠结合不需要的细胞,游离于上清液的细胞为所需细胞
一般而言,负选法比正选法的磁珠用量大。磁分离细胞的重要指标是看纯度和得率,这取决于磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小与非特异性吸附(磁性),然而太小的磁珠得率不高,太大的磁珠又会影响细胞活性,也无法直接上流式。
图一:正选和复选流程
目前市场上有2种磁性细胞分离系统:
(1)Small particles (≈50 nm)-MACS
(2)Large particles (1200~4500 nm)-Dynal
此外由BD公司提供大小约为200nm为中等大小磁珠。
阳性与阴性分选
EXAMPLE
1.阳性分选: 运用特异性抗体偶联磁珠直接从细胞混合物中分离目的细胞的分选方法称为阳性分选。
阳性分选中磁珠标记的细胞即为目的细胞。该方法简单、快速、细胞得率和纯度较高。
2.阴性分选:用抗体偶联磁珠去除无关细胞,使得目的细胞得以纯化和分离的方法叫阴性分选。
例如分离CD4+T细胞时,由于没有专门的CD4+T细胞分选磁珠,实验人员可通过Anti-CD8、anti-B220、anti-CD49b、外加anti-CD11b、anti-Ter119标记磁珠去除CD8+T细胞、B细胞、NK细胞、DC细胞、巨噬细胞、粒细胞等,最终获得较纯的CD4+T细胞。
E
分选磁珠大小
磁珠大小优缺点
小磁珠优点:对细胞温和,不影响分离细胞的后续培养,可直接上流式检测,不影响散射光,且美天旎公司开发的葡聚糖修饰的50nm磁性微球可以降解,对细胞毒性较小。
小磁珠缺点:需要很强的磁场来分离细胞,分离速度慢,得率不高,需要一次性的分离柱,不能在普通试管进行,成本昂贵
大磁珠优点:技术简单,分离可在试管中完成,易于增减细胞用量,速度快,得率高,成本低;
大磁珠缺点:对细胞造成机械压力,影响其生物学活性,不利于分离后培养;
磁性聚合物微球提供1~5um免疫磁珠(与Dynal类似)以及50~200nm可降解的磁性葡聚糖微球(与Miltenyi类似),表面修饰有氨基、羧基、PEG修饰羧基、环氧基 等加长臂基团,帮助更好磁珠法分选细胞。