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河南省洛阳市洛阳国家大学科技园
目前， 细胞免疫治疗成为治疗癌症的另一大利器。
细胞免疫治疗，是调动人体内的免疫细胞，主要是T淋巴细胞，让其发挥更加特异精准的杀死肿瘤细胞的作用。
PD-1/PD-L1
一种免疫治疗方法是以“PD-1/PD-L1”检查点抑制剂为代表的抗体药物。研究表明，肿瘤细胞逃避免疫系统的一种途径是通过其表面蛋白PD-L1配体， 结合T细胞表达的PD-1受体，T细胞活性受到抑制，肿瘤细胞因此躲过T细胞的监视和攻击。而针对PD-1或PD-L1的抗体，可以阻断PD-1和PD-L1结合后的抑制信号，恢复T细胞功能，使其表现显著的抗癌活性。PD-1/PD-L1抗体药物具有广谱性，可以治疗多种癌症，如：肺癌，胃癌，肠癌及皮肤癌等。从2014年开始，美国FDA批准上市的Opdivo、Keytruda、Tecentriq、Bavencio、Imfinzi抗体药物，在癌症治疗领域大放异彩。
另外一种免疫治疗技术就是以CAR-T（嵌合抗原受体T细胞）和TCR-T（T细胞受体修饰的T细胞）为主的过继性细胞回输治疗。
CAR-T
CAR-T技术，简单来说就是利用癌症病人自身的免疫细胞T淋巴细胞，经过基因重组技术，让T细胞能够特异识别肿瘤抗原。再把这些细胞体外培养和扩增，将得到工程化的T细胞回输到病人体内，让其发挥杀伤肿瘤细胞的作用。
在过去六年中，CD19抗原特异性的CAR-T疗法针对B细胞肿瘤的治疗取得了非常好的效果，70%-90%的病人对此疗法有应答。在一些临床案例中，甚至90%以上的病人得到完全缓解。
CAR分子结构主要有三个部分，包括胞外抗原结合区，铰链及跨膜区和胞内信号区：
抗原结合区：由针对肿瘤相关抗原的单克隆抗体的轻链（VL ）和重链（VH ）组成，即ScFv，可以特异识别肿瘤相关抗原。目前靶点以B细胞肿瘤的特异抗原CD19，CD20为主。
胞内信号区：由共刺激分子和免疫受体酪氨酸活化序列组成。免疫受体酪氨酸活化序列通过磷酸化激活下游信号转导分子，加上共刺激分子的共同作用，可以增强T细胞的增殖和活化。
铰链区及跨膜区：用于连接ScFv和胞内信号区。其长度和灵活性可以影响CAR-T细胞功能的执行。
构建针对肿瘤特异抗原CAR的慢病毒。用于转染T细胞，使T细胞表达CAR蛋白。慢病毒转染方法具有效率高，表达持久的特点。
CAR-T细胞的生产：首先抽取病人的外周血（50-80ml），分离出T淋巴细胞，体外培养2-3天。进行慢病毒转染，筛选出成功转染并表达CAR蛋白的T细胞，体外扩增2周，获得总数量在109-1011 的CAR-T细胞。从分离外周血开始，整个流程均在GMP条件下进行。
CAR-T治疗启动，将适当数量的CAR-T细胞输回病人体内。根据治疗效果，制定后续治疗策略，并定期对病人随访。
CAR-T技术在体外和临床实验中显示出良好的特异性，持久性和杀伤活性，可以治疗多种肿瘤，包括淋巴瘤，急淋、慢淋白血病，黑色素瘤和神经胶质瘤等，并且获得良好效果。其特异识别的肿瘤抗原有：α-Folate receptor，CD19，CD20，CD22，CD33，GD-2，GD-3，CAIX，MAGE-A1等。
TCR-T
TCR-T技术，是基于对TCR基因的改造，使T细胞受体与肿瘤抗原的亲和力增强，增强T细胞对肿瘤抗原过量表达的肿瘤细胞的攻击能力。其特点是通过靶细胞表面MHC递呈的肿瘤抗原，识别靶细胞。因此，TCR-T技术既能针对肿瘤细胞表面蛋白，也能识别胞内蛋白。其识别的肿瘤相关抗原有NY-ESO-1，CEA，Her-2，CD19，gp100, MART-1, MAGE-A3。
不管是CAR-T还是TCR-T技术，T细胞的体外培养都需要使用CD3/CD28抗体，刺激T细胞使其获得功能活性。赛默飞公司提供的Gibco™Dynabeads® CD3/CD28 CTS （产品目录号：40203D）磁珠是临床级别产品， 用于人T细胞在体外的分离，活化和扩增。通过在Dynabeads®磁珠上偶联抗CD3和CD28抗体，可以提供T细胞活化和扩增的主要信号及共刺激信号（图1和2）。Gibco™ Dynabeads® CD3/CD28 CTS的生产及质控符合ISO 9001:2000和ISO 13485:2003的要求，药物主文件（DMF）已经递交给FDA。该产品已经应用到大量的临床研究当中。
Dynabeads® CD3/CD28 CTS产品的特点：
仅需9-14天即可获得扩增100-1000倍的T细胞；
获得的T细胞活性可与体内活化的T细胞相媲美；
已应用在国内外多项临床研究当中。
图1. 人体内的T细胞需要抗原递呈细胞(APC)提供刺激信号，才能获得活性。Dynabeads® CD3/CD28 CTS通过球状磁珠与抗体偶联，提供T细胞活化需要的刺激信号。
图 2. Dynabeads® CD3/CD28 CTS与活化扩增后的T细胞。
赛默飞公司同时提供临床级别使用的磁分选设备DynaMag® CTS （图3， 产品目录号：12102），与Dynabeads® CD3/CD28 CTS搭配使用。Dynabeads® CD3/CD28 CTS™刺激/扩增后的T细胞，需要用DynaMag® CTS去除Dynabeads磁珠。此分选设备适用于在密闭，无菌的分选体系中进行细胞分选，如无菌血袋、培养袋及连接管路。
Gibco™ DynaMag® CTS产品特点：
灵活的分选体积：静态分选50-330mL体积。T细胞大量扩增后，可连续分选＞10L的体积。
设备配有次级磁体，用于捕获主磁体分选后残留的磁珠。
密闭无菌体系中分选，避免人为操作及环境因素带来的污染风险。
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今后，赛默飞公司还会推出专用于T淋巴细胞培养的化学成分限定培养基，在细胞培养过程中不需要添加人血清，也能获得快速增殖的T细胞，且保持活性。请大家随时关注赛默飞公司推出的细胞治疗相关产品~
生物磁力架：www.ex-dna.com