核酸提取之RNA提取关键点 磁珠法RNA提取

不同样品总RNA提取的实质就是将细胞裂解，释放出RNA，并通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质，最终获得高纯RNA产物的过程。

 

RNA提取中经常遇到的问题主要有：
 

（1）RNA 的总量不够；
 

（2）RNA 有严重的盐类污染；
 

（3）RNA 有严重的有机溶剂污染；
 

（4）DNA 污染；
 

（5）样品裂解严重。

 

前四项问题都还好解决，只需要再次萃取或进行纯化即可解决，但是样品降解就较为棘手，常常因重新准备一来一往， 耗掉不少心力和时间，最后也拿不到好的结果。这次我们从样品收集开始，分步介绍RNA提取中的关键注意点。

 

 

 

1.样品收集/保存

 

RNA 提取过程中，面临的最大的敌人就是 RNase，RNase 有内源性和外源性之分。

 

对于细胞内存在的内源性 RNase，一般来说，样品采集后，立即用液氮急冻，可冻结 RNase 的活性。

 

若不能及时用液氮冻结，RNA很可能就会被内源性 RNase降解，尤其如血浆含有非常高的核糖核酸（RNase）活性，自采集2小时内RNA就会被降解。

 

遇到不能及时液氮保存的状况，建议采样品保存液

 

 

2.器具耗材清洁

 

 

对于外源性RNase，有以下方法：

 

枪头，离心管等一次性塑料耗材一般用0.1％DEPC，或3% H2O2，或0.5M的NaOH处理，再以灭过菌的 DEPC 水冲洗干净再高温高压灭菌。

 

研钵，玻璃等一般采用180℃ 的高温下干烤 6 小时或更长时间。

 

现在许多耗材公司如Axygen,Corning等推出无RNase的枪头，离心管，一方面节省广大学者时间，另一方面使学者们避免使用致癌物质DEPC。

 

 

然而还有一些不能高温高压灭菌的，比如台面、移液枪、仪器等，应予以表面去污剂处理。


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