核酸提取试剂盒 (磁珠法) 核酸提取基本介绍
Source:狄光辉Author:admin Addtime:2018/07/10 Click:
核酸提取试剂盒 (磁珠法) 核酸提取基本介绍
核酸，分为核糖核酸（简称RNA）和脱氧核糖核酸（简称DNA），作为分子诊断检测对象，目前主要应用于临床各科的诊断中，如肿瘤、感染、遗传等各方面。而核酸提取则是分子诊断实验的“第一步”，是下游核酸检测、研究或产品开发的起点，所提取的核酸的质量和完整性直接影响研究或诊断的结果，因此，核酸提取也是分子诊断中最关键的一步。
核酸提取方法学进展
小磁珠，大用途！
磁性分离是一种简单有效的核酸提纯方法，在磁珠表面连接有可特异地与DNA发生作用的功能基团，具有可逆吸附核酸（DNA/RNA）的特性，通常采用带有氨基、羧基、环氧基等基团的活化试剂对磁珠表面包覆的高分子进行化学修饰，我们通过提供适宜的离子强度、pH等条件，可以实现对核酸的高通量、自动化提取。
核酸提取（磁珠法）原理
核酸结合到磁珠上主要依靠静电作用、疏水作用和氢键作用。细胞或组织在裂解液作用下，其中的DNA/RNA被释放出来。此时经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠即与核酸进行“特异性结合”，形成“核酸-磁珠复合物”。然后在外加磁场的作用下，复合物即分离出来。最后经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂志、去盐、纯化后，即得到目的提取产物。
核酸提取（磁珠法）优势
传统提取法 磁珠法
技术难度不高 高质量、高产量、高通量
仅能手工提取 自动化
操作繁琐、费时费力 免去复杂的人工程序
不适合较大样本量 减少有毒试剂对操作人员的危害
不适合临床分子诊断 符合市场需求
适合多种类型样本处理
血清、血浆、鼻咽拭子、细胞保存液、组织液、尿液和分泌物等。
快速提取，过程简化
1. 配套自动化设备，仅需9min完成一批次核酸提取；
2. 一次洗涤，降低核酸丢失，提高得率，获得更加稳定检测结果。
RNA/DNA同时提取
同时获得高质量的DNA和RNA，多种指标测定仅需一次提取。
自动化
不同包装规格，适用于全自动核酸提取仪、半自动核酸提取仪及手工提取
产品型号 适用机型
A型 适用于手工操作及全自动核酸提取设备
B型 适用于半自动核酸提取设备
性能参数
一、DNA提取为例
样本量为100uL，浓度为15 IU/mL的HBV WHO参考品（NIBSC code: 10/264）经本产品提取，采用 HBV检测试剂盒测定10次，检出率为100%，Ct值CV≤2%（图1）；浓度为1×109IU/mL的DNA假病 毒使用阴性血清稀释至1×108IU/mL、1×107IU/mL、1×106IU/mL、1×105IU/mL、1×104IU/mL、 1×103IU/mL、1×102IU/mL，经本产品提取后测定结果如图2。
图1 HBV(15 IU/mL)参考品扩增曲
图2 DNA样本线性扩增曲线
二、RNA提取为例
样本量为100uL，浓度为50 IU/mL的HCV参考品（5th WHO International Standard forHCV NAT， NIBSC code: 14/150）样本经该试剂盒提取，采用HCV检测试剂盒测定10次，检出率为100%，Ct值CV ＜5%（图3）；浓度为5×107IU/mL的RNA假病毒使用阴性血清稀释至5×106IU/mL、5×105IU/mL、5×104IU/mL、5×103IU/mL、5×102IU/mL，经本试剂盒提取后测定，结果如图4。
图3 HCV(50 IU/mL)参考品扩增曲线
图4 RNA样本线性扩增曲线
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