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植物粗蛋白提取服务

Source:adminAuthor:admin Addtime:2018/11/06 Click:
1、植物组织蛋白质提取方法
 
1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
 
2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。
 
3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃
 
4、提取上清夜,样品制备完成。
 
蛋白质提取液:300ml
 
1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
 
2、甘油(Glycerol)75ml
 
3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g
 
这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!
 
2 、植物组织蛋白质提取方法
 
三氯醋酸—丙酮沉淀法
 
1、在液氮中研磨叶片
 
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。
 
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。
 
4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
 
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。
 
药品:
 
提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮
 
裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。
 
这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!
 
3 、 组织:肠黏膜
 
目的:WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达
 
应用TRIPURE提取蛋白质步骤:
 
含蛋白质上清液中加入异丙醇:(1.5ml每1mlTRIPURE用量)
 
倒转混匀,置室温10min
 
离心:12000 g,10min,4度,弃上清
 
加入0.3M盐酸胍/95%乙醇:(2ml每1mlTRIPURE用量)
 
振荡,置室温20min
 
离心: 7500g,5 min,4度,弃上清
 
重复0.3M盐酸胍/95%乙醇步2次
 
沉淀中加入100%乙醇 2ml