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蛋白纯化和互作服务

Source:羧基磁珠Author:admin Addtime:2018/11/01 Click:
蛋白表达及纯化服务

经验丰富的蛋白专家均具有多年的蛋白表达及纯化服务经验,可帮您打破蛋白表达及纯化的瓶颈,促进您的实验进程!我们的一站式新型服务,方便您直接订购从基因合成到蛋白表达、折叠、纯化以及稳定细胞系的扩大化培养等一整套的服务,您也可以根据自己的需要选择其中的某一项服务。
 
我们先进的纯化服务以及大规模蛋白生产能力,可满足您的任何需求。您可以从选择基因合成服务(免费的密码子优化)到蛋白生产的一整套服务套餐,帮助您完成整个蛋白制备实验!您还可以免费使用我们的稀有密码子分析软件,测试您的基因序列是否理想,是否需要优化,以提高您的目的蛋白表达水平。
 
竞争性优势
特点 GenScript 竞争对手
多种表达系统 ++++ ++
FoldArtTM 蛋白折叠技术 + -
保证型蛋白表达套餐 + -
多种表达系统:金斯瑞拥有4种高质量的蛋白表达系统:bacterial, yeast, baculoviral,以及mammalian systems,可提供给客户少量或大规模的蛋白制备服务。
FoldArtTM 蛋白折叠技术:针对蛋白不溶的问题,我们提供蛋白折叠服务,保证转换30-50%的不溶性蛋白,且交付的折叠蛋白纯度最低可达85%,如果您的蛋白无法折叠或复性后仍不溶,我们将不收取服务费用。
灵活的纯化系统:亲和柱(GST, Ni-IDA, protein A/G/L resins),凝胶过滤,离子交换,疏水层析,高性能液体色谱。
大规模生产: bacterial, yeast, baculovirus/insect cell, 以及mammalian systems,具有大规模的产能的四种系统均可制备高质量的克级蛋白。
客户信息安全保证
 

蛋白质互作:串联亲和纯化(TAP-MS)

技术简介:
        蛋白质互作研究按照实验目的可分为两大类,一是验证两个蛋白是否存在相互作用,二是筛选某个兴趣蛋白的互作蛋白。
        目前,常用的蛋白质互作分析技术有:免疫共沉淀(CO-IP),pull-down、串联亲和纯化法(tandem affinity purification,TAP)和基于SILAC技术的免疫共沉淀(SILAC-IP)等。
        其中CO-IP、Pull-down常被用来验证两个蛋白的相互作用;虽然CO-IP或Pull-down结合质谱的方法也可用来筛选互作蛋白,但常常会带来很多假阳性结果;因此,TAP和SILAC-IP技术在筛选互作蛋白的研究方面表现出了一定优势。
        串联亲和纯化技术 (tandem affinity purification,TAP)与COIP技术筛选互作蛋白的原理类似。不同的是TAP技术使诱饵蛋白带上了2个纯化标签,利用标签对蛋白复合物进行了两轮纯化(串联亲和纯化),使洗脱液中的非特异性蛋白降至较低水平。结合LC-MS/MS技术,分别鉴定出实验组和阴性对照组洗脱液中的蛋白质种类,从而找到实验组中独有的蛋白质,即可能的互作蛋白。
 
应用领域:
        信号通路研究:寻找特定目标蛋白的互作蛋白。
 
技术流程:
        构建诱饵蛋白的双标载体——包装慢病毒——筛选稳转株——提取总蛋白——串联亲和纯化——洗脱液的蛋白酶解——LC-MS/MS——蛋白质定性和定量结果——筛选实验组独有蛋白
 
技术优点:
        1. 捕获到的是天然互作的蛋白,符合体内真实生理情况,可信度高。
        2. 采用两步纯化,能有效减少假阳性率。
 
参考文献:
        1.Proteomic Analysis of the Human Cyclin-dependent Kinase Family Reveals a Novel CDK5Complex Involved in Cell Growth and Migration.Mol Cell Proteomics. 13(11):2986-3000(2014).
        2.Defining the protein-protein interaction network of the human protein tyrosine phosphatase
        3.Family.Mol Cell Proteomics. 15(9):3030-44(2016).
        4.Novel interacting proteins identified by tandem affinity purification coupled to nano LC-MS/MS interact with ribosomal S6 protein kinase 4 (RSK4) and its variant protein (RSK4m). Int J BiolMacromol. 96:421-428(2017).

蛋白纯化和蛋白互做服务:www.ex-dna.com